采用高效液相色谱( HPLC) 法对桦褐孔菌中的麦角甾醇、白桦脂醇、羊毛甾醇、胆甾醇、谷甾醇和豆甾醇进行了定量分析，但存在分离时间长、 溶剂消耗大等传统液相色谱共有的缺点。超高 效液相色谱( UPLC) 作为一种新型的色谱技术，因其简单、快速( 几分钟内出峰) 、节省溶剂、检出限 低、色谱柱耐高压、填充颗粒小、分离效果好的特点， 得到了广泛的应用。上海亚荣生化仪器厂专业研发销售旋转蒸发器，在本文介绍UPLC法对桦褐孔菌中的3种主要成分原儿茶醛、丁香酸、 ( E) -4-( 3， 4-二羟基苯基) 丁-3-烯-2-酮同 时进行了定量分析，旨在为桦褐孔菌的质量评价和资源开发利用提供参考资料。
1、上海亚荣生化仪器厂文中介绍本厂实验所需要的材料与仪器
实验材料：分别以产地为黑龙江大兴安岭、吉林长白山、俄罗斯西伯利亚的桦褐孔菌子实体作为实验材料，经鉴定为桦褐孔菌子实体。
试剂与仪器：主要试剂:甲醇、乙腈为色谱纯，购置于赛默飞世尔科技( 中国) 有限公司; 其他试剂均为分析纯，购置于成都科龙化工试剂厂; 原儿茶醛、丁香酸、 ( E) -4-( 3， 4-二羟基苯基) 丁-3-烯-2-酮均 为本实验室分离纯化得到( 纯度≥98%) 。
主要仪器：超高效液相色谱仪( UPLC) ，配备二极管阵列检测器( PDA，美国 Waters 公司) ， SB300DTY 型超声波扫频清洗机( 宁波新芝生物科技 股份有限公司) 、 MS半微量电子精密分析天平( 瑞士Mettler-Toledo 公司) 、冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂 ) 、纯水机( 成都浩康科技有限公司) 、旋转蒸发器ＲE -52AA( 上海亚荣生化仪器厂) 。
2、方法与结果
色谱条件 色谱柱为COＲTECS UPLC T3 ( 2.1mm×100mm，1.6μm) ，流动相A为乙腈， B为0．1%甲酸水溶液，流速0．4mL/min，采用梯度洗脱方法：10%—30% A ( 0—1.5min) ，30—42% A ( 1.5— 5min) ，42—90%A( 5—6min) ，90—10%A( 6—6.01min) ，10% A ( 6．01—8min) ；样品室温25℃、柱温40℃;检测波长280nm;进样量1μL。
对照品溶液的制备：精密称取原儿茶醛、丁香酸、 ( E) -4- ( 3， 4-二羟基苯基) 丁-3 -烯 -2 - 酮对照品适量，用色谱甲醇分别配制成1.20mg/mL的母液，等体积吸取各对照品溶液混合，即得400μg/mL的混合对照品储备液，备用。
样品溶液的制备：称取桦褐孔菌子实体粉末1g，加入25mL的95%乙醇，在40℃、59KHz 条件下超声提取20min，重复3次，抽滤，合并滤液，在上海亚荣RE-52AA旋转蒸发器中真空浓缩至干燥，加适量水重悬，按体积比 1∶ 1 依次用正己烷( 5 次) 、二氯甲烷( 10次) 进行萃取，二氯甲烷萃取液置于上海亚荣RE-52AA旋转蒸发器中减压浓缩至干。燥，即得二氯甲烷萃取相。取适量称重，配制成100μg/mL的样品液，0．22μmPTFE微孔滤膜过滤，12000rpm，离心5min，取上清待用。
本文所定量的3 种主要化合物是本实验室采用高速逆流色谱联合半制备液相色谱法首次分离纯化得到，均其有较好的生物活性，是桦褐孔菌发挥抗炎、抗肿瘤、抗氧化等作用的活性成分，因此对其进行定量有助于后续对桦褐孔菌活性的研究。以上内容供大家参考，如果实验需要用到旋转蒸发器，首选上海亚荣生化仪器厂。
